さらなる試験のための規制に対する有効性
血漿、肝細胞、ミクロソーム検査
包括的な薬物安定性評価
これらの研究は、化合物の半減期を測定し、固有のクリアランスを計算し、ファーストインヒューマン試験を見越してヒトの薬物動態プロファイルを予測するために使用されます。
代謝安定性の方法
肝細胞における代謝安定性
試験品を、2つの濃度でウィリアム培地Eに懸濁した約1 x 106 肝細胞/mLと共に最大5つの時間点でインキュベートし、有機溶媒の添加によって停止します。
コントロールインキュベーションは、インキュベーション条件下での試験品の安定性を決定するためにのみ、インキュベーション培地で実行されます。 各肝細胞ロットの代謝完全性は、7-エトキシクマリンまたはその他の適切なマーカーで評価されます。
血漿中の代謝安定性
試験品は、血漿中で最大5つの時間点で2つの濃度でインキュベートされ、有機溶媒の添加によって停止されます。 ポジティブコントロールのインキュベーションには、プロカイン(カルボキシルエステラーゼによって加水分解される)またはその他の適切な代謝マーカーが含まれます。
ミクロソームの代謝安定性
試験品は、NADPHの存在下でミクロソーム(0.5 mg / mlタンパク質)と2つの濃度で最大5つの時間ポイントまでインキュベートされ、有機溶媒の添加によって停止されます。 コントロールインキュベーションは、NADPHの不在下で実施され、インキュベーション条件下での試験品の安定性を判断します。
各ミクロソームロットの代謝完全性は、7-エトキシクマリンまたはその他の適切なマーカーを使用して、フェーズ1酵素について評価されます。
サンプル分析
インキュベーションサンプルは、液体クロマトグラフィー質量分析(LC-MS)分析法を使用して、残りの試験品について分析されます。 次に、サンプル中の残りの試験品の割合を、初期濃度と比較して決定します。 承認後、選択されたサンプルをさらに分析して、LC-MSによって代謝物を特性評価または同定することができます。
これらのアッセイは、細胞または細胞小器官画分を利用して、薬物安定性情報（半減期および内因性クリアランスで計算）を提供します。 代謝産物のプロファイリングと同定のためのインキュベーションをさらに分析することで、生体内変化経路を解明し、前臨床試験種とヒト代謝産物とのより良い比較が可能になります。
