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代谢稳定性

在与肝细胞、肝微粒体或血浆孵育后测量母体化合物的消失或代谢物的出现，从而能够计算半衰期和内在清除率。 然后可以阐明测试物品和代谢物谱的生物转化。

  • 进一步试验的监管功效

  • 血浆、肝细胞和微粒体检测

  • 全面的药物稳定性评估

代谢稳定性研究的监管考虑因素

这些研究用于测量化合物半衰期、计算内在清除率并预测人体药代动力学特征，以期进行首次人体试验。

代谢稳定性方法

  • 测试系统： 混合冷冻保存的肝细胞、肝微粒体或血浆
  • 测试物种： 老鼠、大鼠、狗、兔子、迷你猪、猴子和人类；根据要求提供其他物种
  • 测试品浓度： 每个物种（1 和 10 μM）测试两种浓度，三次重复

肝细胞的代谢稳定性 

将测试物品以大约 1 x 10 6 个肝细胞/ mL 悬浮在威廉培养基 E 中孵育两种浓度，最多 5 个时间点的孵育，并通过添加有机溶剂停止。

在孵育培养基中进行对照孵育，仅用于确定供试品在孵育条件下的稳定性。 每个肝细胞批次的代谢完整性用 7-乙氧基香豆素或其他合适的标志物进行评估。

血浆中的代谢稳定性

将测试物品在血浆中以两种浓度孵育最多 5 个时间点，并通过添加有机溶剂停止。 阳性对照孵育包括普鲁卡因（被羧酸酯酶水解）或其他合适的代谢标志物。

微粒体的代谢稳定性

将供试品以两种浓度与微粒体（0.5 mg/ml 蛋白质）在 NADPH 存在下孵育，测定最多五个时间点，并通过添加有机溶剂终止反应。 在没有 NADPH 的情况下进行对照孵育，以确定供试品在孵育条件下的稳定性。

使用7-乙氧基香豆素或其他合适的标记物评估每个微粒体批次的I相酶的代谢完整性。

样品分析

使用液相色谱-质谱（LC-MS）分析方法分析剩余测试物品的孵育样品。 然后确定样品中剩余测试物品的百分比，并与初始浓度进行比较。 经批准后，可以进一步分析选定的样品，以通过 LC-MS 表征或鉴定代谢物。


交付物

这些测定利用细胞或亚细胞组分提供药物稳定性信息（在半衰期和内在清除率下计算）。 进一步分析用于代谢物分析和鉴定的培养过程可以阐明生物转化途径，并允许更好地比较临床前测试物种与人类代谢物。