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대사 안정성

모화합물의 소멸이나 대사산물의 출현은 간세포, 간 미세소체 또는 혈장과 함께 배양한 후 측정하여 반감기와 내재적 클리어런스를 계산할 수 있습니다. 그러면 시험 물질의 생물학적 변형과 대사산물 프로필을 밝힐 수 있습니다.

  • 추가 시험에 대한 규제 유효성

  • 혈장, 간세포 및 미세소체 검사

  • 포괄적인 약물 안정성 평가

대사 안정성 연구에 대한 규제 고려 사항

이러한 연구는 화합물의 반감기를 측정하고, 내재적 클리어런스를 계산하고, 최초의 인체 임상 시험에 대비하여 인간의 약물동태학적 특성을 예측하는 데 사용됩니다.

대사 안정성을 위한 방법

  • 테스트 시스템: 냉동 보존된 간세포, 간 미세소체 또는 혈장을 결합된
  • 시험 종: 생쥐, 쥐, 개, 토끼, 미니돼지, 원숭이 및 인간; 요청 시 추가 종 제공
  • 시험 물질 농도: 종당 두 가지 농도(1 및 10 µM)를 3회 반복하여 테스트했습니다.

간세포의 대사 안정성

시험물질은 두 가지 농도로 약 1 x 10 6 간세포/mL을 윌리엄 배지 E에 최대 5개의 시간 지점에서 현탁시킨 후 유기 용매를 첨가하여 중단시켰습니다.

대조 배양은 배양 조건에서 시험 물질의 안정성을 확인하기 위해 배양 매체에서만 수행됩니다. 각 간세포의 대사적 무결성은 7-에톡시쿠마린이나 다른 적합한 마커를 사용하여 평가됩니다.

혈장 내 대사 안정성

시험 물질은 최대 5개 시점까지 혈장에서 두 가지 농도로 배양되고 유기 용매를 첨가하여 중단됩니다. 양성 대조군 배양에는 프로카인(카르복실에스테라제에 의해 가수분해됨)이나 기타 적합한 대사 마커가 포함됩니다.

미세소체의 대사 안정성

시험 물질은 NADPH 존재 하에 미세소체(0.5 mg/ml 단백질)와 함께 두 가지 농도로 최대 5개 시간 동안 배양한 후 유기 용매를 첨가하여 중단합니다. 대조 배양은 NADPH가 없는 상태에서 수행되어 배양 조건에서 시험 물질의 안정성을 확인합니다.

각 미세소체 로트의 대사 무결성은 7-에톡시쿠마린이나 다른 적합한 마커를 사용하여 1상 효소에 대해 평가됩니다.

샘플 분석

나머지 시험 물질에 대한 배양 샘플은 액체 크로마토그래피-질량 분석법(LC-MS) 분석 방법을 사용하여 분석됩니다. 그런 다음 샘플에 남아 있는 시험 물질의 백분율을 초기 농도와 비교하여 결정합니다. 승인 후, 선택된 샘플은 LC-MS를 통해 대사산물을 특성화하거나 식별하기 위해 추가 분석될 수 있습니다.


성과물

이러한 분석법은 세포 또는 세포 내 분획을 활용하여 약물 안정성 정보(반감기 및 내재적 클리어런스에서 계산)를 제공합니다. 대사산물 프로파일링 및 식별을 위한 배양에 대한 추가 분석을 통해 생물학적 변형 경로를 밝히고 임상 전 시험 종과 인간 대사산물을 더 잘 비교할 수 있습니다.