Skip to main content

酶抑制

细胞色素 P450（CYP）和 UGT 酶的抑制是临床相关药物相互作用的主要原因。 通过确定测试物对人 CYP 酶选择性探针底物在混合人肝微粒体孵育中的代谢影响来评估其抑制潜力。 可以进一步表征抑制酶动力学，所得数据用于预测给药后是否可能发生具有临床意义的药物相互作用 (DDI)。

  • FDA 和 EMA 推荐的研究

  • 细胞毒性和稳定性测定

  • CYP mRNA 和酶诱导

酶抑制研究的监管注意事项

FDA 和 EMA 药物相互作用（DDI）指南都建议这些研究在进行首次人体试验之前生成有关可逆（直接）和不可逆（时间依赖性）细胞色素 P450 抑制的数据。 抑制数据用于确定临床 DDI 研究的要求和范围。

方法

  • 测试系统： 混合人肝微粒体（HLM）
  • 评估的 CYP 酶： CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1 和 CYP3A4/5
  • 根据要求在直接抑制测定中评估的 UGT 酶： UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT11A6、UGT1A9、UGT2B7、UGT2B15 
  • 测试品浓度： 8 个浓度一式三份
  • 所有样品制备和孵育均使用 Hamilton Microlab Star 自动液体处理系统进行

 

CYP 抑制在直接和代谢依赖性测定中测量。 使用 CYP 选择性底物，其底物浓度达到每种 CYP 酶最大反应速度（Km）的一半（见下文）。 已知抑制剂用作直接和代谢依赖性抑制测定的阳性对照。 所有孵育都通过添加冷冻乙腈来终止，其中含有对 CYP 底物特异性的稳定标记的内部代谢物标准品。

时间依赖性（不可逆）抑制

使用 8 种浓度的测试物质的测定在 NADPH 不存在和存在的情况下孵育 30 分钟，然后稀释至探针底物测定混合物中。 如果观察到显着的时间依赖性抑制，则可以确定其他动力学参数，包括失活常数（k失活）和抑制常数（KI）。 这些参数通过实验确定，通过改变预孵育时间和抑制剂浓度，可以帮助确定药物相互作用的可能性。 

直接抑制

在测试物品的 8 种不同浓度的存在和不存在的情况下进行检测，以确定抑制潜力并在可能的情况下定义 IC50。

直接抑制可以通过使用 5 种不同浓度的探针底物来确定抑制常数（Ki）和观察到的抑制类型，从而进一步表征。

细胞色素 P450底物分析物直接抑制时间依赖性抑制
CYP1A2苯那西丁对乙酰氨基酚氟伏沙明呋喃芬林
CYP2B6安非他酮羟基安非他酮奥芬那君硫代TEPA
CYP2C8阿莫地喹去乙基氨地喹孟鲁司特吉非罗齐 1-O-β-葡萄糖醛酸酯
CYP2C9双氯芬酸4'- 羟基双氯芬酸磺苯唑噻尼克酸
CYP2C19甲苯妥英4'-羟基美芬妥因努特卡通埃索美拉唑
CYP2D6右美托芬右旋吗啡烷奎尼丁帕罗西汀
CYP3A4/5睾酮6β- 羟基睾酮酮康唑红霉素
CYP3A4/5咪达唑仑1'- 羟基咪达唑仑酮康唑曲烯霉素

 

交付物

这些测定将为直接或不可逆抑制 CYP 酶提供 IC50 值。 如果观察到显着的直接抑制，则可以确定抑制常数（Ki）。 如果观察到显着的时间依赖性抑制，则可以确定基于机制的失活参数（K、I 和 kinact）。 有了这些参数，药理学可以在评估临床试验的必要性时提供额外的指导。