Conformité réglementaire pour d’autres essais
Tests plasmatiques, hépatocytaires et de microsomes
Évaluation complète de la stabilité du médicament
Ces études sont utilisées pour mesurer la demi-vie des composés, pour calculer la clairance intrinsèque et pour prédire les profils pharmacocinétiques humains en prévision des premiers essais chez l’homme.
Méthode de stabilité métabolique
Stabilité métabolique dans les hépatocytes
L’article d’essai est incubé à deux concentrations avec environ 1 x 106 hépatocytes/mL en suspension dans le milieu E de William jusqu'à 5 points temporels et arrêté par l’ajout d’un solvant organique.
Les incubations témoins sont effectuées dans le milieu d’incubation uniquement pour déterminer la stabilité de l’article d’essai dans des conditions d’incubation. L’intégrité métabolique de chaque lot d’hépatocytes est évaluée à l’aide de la 7-éthoxycoumarine ou d’un autre marqueur approprié.
Stabilité métabolique dans le plasma
L’article d’essai est incubé à deux concentrations dans le plasma pendant un maximum de 5 points temporels et arrêté par l’ajout d’un solvant organique. Les incubations de témoins positifs comprennent la procaïne (hydrolysée par la carboxylestérase) ou un autre marqueur métabolique approprié.
Stabilité métabolique dans les microsomes
L’article d’essai est incubé à deux concentrations avec des microsomes (0,5 mg/ml de protéines) en présence de NADPH pendant un maximum de 5 points temporels et arrêté par l’ajout d’un solvant organique. Des incubations témoins sont effectuées en l’absence de NADPH afin de déterminer la stabilité de l’article d’essai dans des conditions d’incubation.
L’intégrité métabolique de chaque lot de microsomes est évaluée pour les enzymes de phase 1 à l’aide de la 7-éthoxycoumarine ou d’un autre marqueur approprié.
Analyse d’échantillons
Les échantillons d’incubation sont analysés pour le reste de l’article d’essai à l’aide d’une méthode analytique de chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS). Le pourcentage d’article d’essai restant dans les échantillons est ensuite déterminé par rapport à la concentration initiale. Une fois l’approbation obtenue, les échantillons sélectionnés pourront être analysés davantage afin de caractériser ou d’identifier les métabolites par LC-MS.
Ces tests fournissent des informations sur la stabilité du médicament (calculées à la demi-vie et à la clairance intrinsèque) en utilisant des fractions cellulaires ou subcellulaires. Une analyse plus poussée des incubations pour le profilage et l’identification des métabolites peut élucider les voies de biotransformation et permettre une meilleure comparaison entre les espèces d’essai précliniques et les métabolites humains.
