ddPCR 技术基于在水油乳液中将核酸样品分配成数万个具有规定体积的微滴。 目标核酸序列的扩增是在每个微滴内进行的，使用与标准 TaqMan® 探针测定中相似的工作流程和试剂。 根据扩增后的荧光检测，对每个液滴进行计数并评分为 PCR 阳性或 PCR 阴性。 原始样品中的目标 DNA/RNA 模板浓度（拷贝数/μl）使用泊松分布进行定量。1,2
ddPCR 可以测量每个样品体积的核酸序列的绝对量，而无需从标准曲线或参考标准品进行外推。 它可以检测 qPCR 可能无法检测到的极小样品量中的小幅度变化。由于每个样本有数千个数据点，ddPCR 结果比 qPCR 结果更准确、更灵敏和精确。
ddPCR 可以检测可以构建引物和探针的任何类型的 DNA 或 RNA 序列，例如 ctDNA、cfDNA/RNA、mRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、miRNA 或 siRNA。
任何含有 DNA 或 RNA 序列的样本都可以用于 ddPCR，如细胞和组织裂解物、组织、生物体液（血液、脑脊液、泪液、尿液、唾液等）、细胞上清液或合成核酸产物。
与 qPCR 一样，典型的运行大约需要四个小时。 ddPCR 工作流程需要额外的步骤来创建数万个纳升大小的油微滴。 然而，ddPCR 读数器的简化数字分析抵消了此步骤的额外时间。
由提取/分离/纯化的 DNA/RNA 组成的样品可以立即使用 Bio-Rad QX200 ddPCR 系统运行和分析。 在进行 ddPCR 测定之前，细胞上清液和细胞/组织裂解物需要 DNA 或 RNA 提取/分离/纯化。 为确保 Labcorp 实验室工作人员的安全，组织、生物体液和细胞上清液在 Labcorp 实验室处理之前需要进行强制性病原体检测。 此外，所有人类来源的材料（组织或体液）、微生物或病毒、在具有潜在生物危害污染的生物系统中产生的产品以及重组和/或合成核酸分子都需要填写生物安全注册表，并在处理材料之前获得 Labcorp PCO 生物安全委员会的批准。
如果您在运输用于 ddPCR 的样品之前没有提取/分离/纯化 DNA/RNA，Labcorp PCO 建议在冷冻和运输之前使用核酸保存溶液（如 RNAlater®、DNA/RNA ShieldTM 或 RNAprotect®）保护/稳定/保存细胞和组织样品中的核酸。
所有样品都应在冷冻状态下装在装有干冰的隔热盒中运输。
1. QX200 液滴数字 PCR 系统。 BIO-RAD. https://www.bio-rad.com/en-us/life-science/digital-pcr/qx200-droplet-digital-pcr-system。
2. Taylor SC，Laperriere G，Germain H. 液滴数字 PCR 与 qPCR 相比，用于低丰度靶标的基因表达分析： 从可变的无义突变到出版质量的数据。 科学报告 2017；7：2409。doi：10.1038/s41598-017-02217-x。
