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Funktionen der spektralen Durchflusszytometrie

Die Vollspektrum-Technologie hat die Durchflusszytometrie auf die nächste Stufe der Leistung und Flexibilität gehoben und bietet tiefgreifende Immunphänotypisierungsfunktionen mit hervorragender Auflösung.
  • Spektrale Entmischung für eine tiefere Immunprofilierung

  • Intuitives Panel-Design zum Anpassen von Panels

  • Autofluoreszenz-Extraktion für verbesserte Empfindlichkeit und Auflösung

Wie funktioniert die spektrale Durchflusszytometrie?

Die spektrale Durchflusszytometrie bietet einzigartige optische Erfassungs- und Analysefunktionen, die die Verwendung einer Vielzahl von Fluorochrom-Kombinationen ermöglichen, ohne das System für jede Anwendung neu konfigurieren zu müssen, was zu einer außergewöhnlichen Empfindlichkeit bei einfacher und intuitiver Bedienung führt. Für jedes Fluorochrom, das an zelluläre Marker gebunden ist, werden Vollspektrum-Signaturen generiert, die zur Identifizierung verschiedener Zelltypen verwendet werden. Verschiedene Signaturen, die in einer mehrfarbigen Probe vorhanden sind, werden dann entmischt, um die Verwendung von Fluorochromen mit engen Emissionsspitzen in derselben Probe zu ermöglichen. Diese Erweiterung der Fluorochrom-Optionen und des Potenzials für die Panelgröße sowie das vakuumbetriebene Fluidiksystem machen die spektrale Durchflusszytometrie Cytek® Aurora besonders geeignet für Studien, bei denen nach einzigartigen Biomarker-Signaturen gesucht wird oder die Probenverfügbarkeit begrenzt ist.

In einem herkömmlichen Durchflusszytometer können Pacific Blue und Brillantviolett 421 (BV421) nicht zusammen verwendet werden, da die spektralen Signaturen zu ähnlich sind.


In einem herkömmlichen Durchflusszytometer können Pacific Blue und Brillantviolett 421 (BV421) nicht zusammen verwendet werden, da die spektralen Signaturen zu ähnlich sind. In der spektralen Durchflusszytometrie weisen Pacific Blue und BV421 genügend Unterscheidungen (einen Komplexitätsindex von 0,78) in ihren spektralen Signaturen auf, um in Kombination verwendet zu werden.

Vorteile der spektralen Durchflusszytometrie
 

Mehr Erkennung

5 Laser mit 64 Fluoreszenzdetektoren

Größere Flexibilität

Verwendung einer breiten Palette neuer Fluorochrom-Kombinationen, ohne dass optische Filter neu konfiguriert werden müssen

Hervorragende Empfindlichkeit

  • Entmischung von Fluorochrom mit engen Emissionsspitzen
  • Verwendung von Autofluoreszenzextraktion zur Verbesserung der Datenklarheit

Mehr Farben

Detektion von bis zu 40 verschiedenen Zelltypen/Zielen in derselben mehrfarbigen Probe

System mit hohem Wert

Größere Datensätze, die aus kleineren Stichprobengrößen generiert wurden

Fortschrittliche Technologie mit voller analytischer Kompatibilität und vertrauten Arbeitsabläufen

Die spektrale Durchflusszytometrie bietet mehrere Vorteile gegenüber der konventionellen Durchflusszytometrie und ist gleichzeitig für komplexe Analysen von multiparameter-durchflusszytometrischen Daten zugänglich, wie z. B. die t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding (tSNE)-Analyse, die eine unvoreingenommene Analyse aller Marker im Panel ermöglicht, um phänotypische Veränderungen innerhalb von Zelluntergruppen zu erkennen, die sonst unentdeckt bleiben würden. Die spektrale Durchflusszytometrie verfügt über alle Funktionen der konventionellen Durchflusszytometrie, folgt dem gleichen Arbeitsablauf und den gleichen Anforderungen, erweitert jedoch ihre Funktionalitäten.

4T1-Luc2-1A4 tSNE-Analyse Die Darstellung traditioneller Gating-Populationen über die tSNE-Karte ermöglicht die Visualisierung von Verschiebungen in der Expression beliebiger Panelmarker (Populationsverschiebungen) zwischen Behandlungsgruppen

    Fortschrittliche Technologie mit voller analytischer Kompatibilität und vertrauten Arbeitsabläufen

    Große Erkenntnisse aus kleinen Stichproben

    Unser Expertenteam für Durchflusszytometrie kann eine gründliche Immunphänotypisierung Ihrer In-vivo-Studie durchführen, um Veränderungen zu erfassen, die in der Immunantwort auftreten, die durch die Behandlung mit dem Testmittel ausgelöst wird. Nachfolgend finden Sie eine Liste unserer Standard-Spektralpanels. Diese Panels können mit zusätzlichen Markern versehen werden, und es können vollständig kundenspezifische Panels für Ihre Assay-Anforderungen entwickelt werden.

    Bietet immunphänotypische Analyse von 19 verschiedenen myeloischen Untergruppen

    Antikörper/Farbstoff

    Beschreibung

    CD45

    Panhämatopoetischer Zellmarker

    CD45 (Maus)

    Ausschluss von Immunzellen der Maus

    CD3

    Pan-T-Zellmarker

    CD4

    CD4+ T-Zell-Marker

    CD8

    CD8+ T-Zell-Marker

    FoxP3

    Regulatorischer T-Zell-Marker

    CD56

    Natürliche Killerzelle/natürliche Killer-T-Zell-Marker

    CD16

    Differenzierungsmarker

    CD19

    B-Zell-Marker

    CD20

    B-Zell-Marker

    CD11b

    Marker für pan-myeloische Abstammungslinien

    CD68

    Makrophagen-Marker

    HLA-DR

    M1-Makrophagen-Marker

    CD163

    M2-Makrophagen-Marker

    CD14

    Monozyten-Marker

    CD33

    Myeloische Abgrenzung

    CD84

    MDSC-Marker

    CD11c

    Dendritische Zellmarker

    BDCA3 (CD141)

    DC1-Teilmenge-Marker

    BDCA1 (CD1c)

    Markierung der DC2-Teilmenge

    CCD123

    pDC-Marker/Basophil-Marker

    CD66b

    Neutrophilen-Marker

    CD15

    Neutrophilen-Marker

    CD86

    Reifungsmarker

    Viabilitäts-Farbstoff

    Ausschluss toter Zellen

    Bietet absolute Zählungen, Quantifizierung von 13 lymphoiden und myeloischen Untergruppen, Gedächtnis-T-Zellmessungen und Analyse von 12 funktionellen Markern zur Profilierung von T-Zellen, dendritischen Zellen, Makrophagen und MDSC-Phänotypen

    Panel 1: Antikörper/Farbstoff

    Beschreibung

    CD45

    Panhämatopoetischer Zellmarker

    CD3

    Pan-T-Zellmarker

    CD4

    CD4+ T-Zell-Marker

    CD8

    CD8+ T-Zell-Marker

    FoxP3

    Regulatorischer T-Zell-Marker

    CD25

    Regulatorischer T-Zell-Marker

    CD44

    Aktivierung/Gedächtnismarker

    CD62L

    Naive T-Zelle/Gedächtnismarker

    PD-1

    Aktivierungs-/Erschöpfungsmarker

    CD69

    Aktivierungsmarker

    LAG-3

    Aktivierungs-/Erschöpfungsmarker

    TIM-3

    Erschöpfungsmarker

    ICOS

    Aktivierungsmarker

    Granzyme B

    marker für Zytotoxizität

    CKi-67

    Proliferations-marker

    CD49b/CD335

    Natürliche Killerzelle/natürliche Killer-T-Zell-Marker

    CD19

    B-Zell-Marker

    CD11b

    Marker für pan-myeloische Abstammungslinien

    Ly-6G

    Granulozytär-MDSC/ Neutrophilenmarker

    Ly-6C

    Monozytär-MDSC/Monozyten-Marker

    CD11c

    Dendritische Zellmarker

    CD24

    Abgrenzung der dendritischen Zellen

    F4/80

    Pan-Makrophagen-Marker

    MHC Klasse II

    M1 Makrophagen & dendritische Zell-Marker

    CD206

    M2-Makrophagen-Marker

    CD103

    DC1-Teilmenge-Marker

    XCR1

    Kreuzpräsentierender/Migrierender dendritischer Zellmarker

    CD80

    Reifungsmarker 

    CD86

    Reifungsmarker

    MARG1

    Myeloischer funktioneller Marker

    iNOS

    Myeloischer funktioneller Marker

    PD-L1

    Immunsuppression

    Viabilitäts-Farbstoff

    Ausschluss toter Zellen

     

    Panel 2: Antikörper/Farbstoff

    Beschreibung

    Zählung von Fluorosphären-Kugeln

    Reagenz für die Zellzählung

    CD45

    Panhämatopoetischer Zellmarker

    Viabilitäts-Farbstoff

    Ausschluss toter Zellen

    Bietet eine tiefgreifende phänotypische Analyse der T-Zell-, NK- und B-Zell-Untergruppen durch die Kombination von 11 Aktivierungs- und Erschöpfungsmarkern. Eingeschlossen ist die Abgrenzung des naiven Stammzellgedächtnisses, des zentralen Gedächtnisses, des Effektorgedächtnisses, des terminalen Effektors und des geweberesidenten Gedächtnisses (Trm).

    Antikörper/Farbstoff

    Beschreibung

    CD45

    Panhämatopoetischer Zellmarker

    CD3

    Pan-T-Zellmarker

    CD4

    CD4+ T-Zell-Marker

    CD8

    CD8+ T-Zell-Marker

    TCRgd

    Gamma-Delta-T-Zell-Marker

    FoxP3

    Regulatorischer T-Zell-Marker

    CD25

    Aktivierungs-/regulatorischer T-Zell-Marker

    CD69

    Aktivierungsmarker

    LAG3

    Aktivierungs-/Erschöpfungsmarker

    CD27

    Aktivierungsmarker

    ICOS

    Aktivierungsmarker

    TIM3

    Erschöpfungsmarker

    PD-1

    Aktivierungs-/Erschöpfungsmarker

    TIGIT

    Markierung der Erschöpfung

    TCF7

    Markierung der Erschöpfung

    Granzym B

    Marker für Zytotoxizität

    CXCR5

    Rekrutierung von T-Zellen

    CXCR3

    Rekrutierung von T-Zellen

    CD56

    Natürliche Killerzelle/natürliche Killer-T-Zell-Marker

    CD16

    Natürliche Killerzelle/natürliche Killer-T-Zell-Marker

    CD19

    B-Zell-Marker

    CD20

    B-Zell-Marker

    Ki-67

    Proliferations-Marker

    CD45RA

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    CD45RO

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    CCR7

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    CD62L

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    CD95

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    CD103

    Abgrenzung der Gedächtnis-T-Zellen

    Viabilitäts-Farbstoff

    Ausschluss toter Zellen

    Häufig gestellte Fragen zu den Funktionen der spektralen Durchflusszytometrie

    Die spektrale Durchflusszytometrie bietet in den folgenden Szenarien einzigartige Vorteile gegenüber der herkömmlichen Durchflusszytometrie:

    • Wenn die Probenverfügbarkeit begrenzt ist
    • Wenn ein tiefes Immunprofiling erforderlich ist, um bis zu 40 Ziele zu analysieren
    • Bei der Analyse von Probentypen mit hoher Autofluoreszenz, wie z. B. Lungengewebe
    • Wenn eindeutige Biomarker-Signaturen gesucht werden
    • Wenn Partikel mit einer Größe von nur 100 nm analysiert werden müssen

    Wir verfügen über spektrale Immunphänotypisierungspanels für Human- und Mausproben:

    • Spectral Human CompLeukocyte™-Panel
    • Spectral Human CompLymphocyte™-Panel
    • Spectral Erweitertes CompLeukocyte™ (murine) Paket
    • Cytek®-validierte Panels können auch wie hier bereitgestellt verwendet werden cytekbio.com/collections/kits

    Farbstoffe, die im 365-829-nm-Bereich emittieren, können mit den hochempfindlichen Coarse Wavelength Division Multiplexing-Halbleiterarrays effizient erfasst werden.